荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种通过实时监测荧光信号来定量分析DNA或RNA的先进技术，具有高灵敏度、高特异性和快速定量的优点。因此，它在生物医疗领域得到了广泛应用。本技术通过在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，能够实现对核酸分子的定量检测。

基本原理

荧光定量PCR的基本原理为，在PCR反应中，除了传统的模板DNA、引物、dNTPs、聚合酶和缓冲液外，还需要添加荧光基团。这些荧光基团的种类不同，使得荧光定量PCR可以主要分为荧光染料法和荧光探针法两种主要类型。

荧光染料法

以SYBR Green I为代表的荧光染料法能够特异性地结合双链DNA。在未结合状态下，这种染料几乎不发荧光，但当与DNA结合后，荧光信号显著增强。随着PCR产物的增加，染料的结合量上升，荧光信号随之增强，有效监测双链DNA的扩增。然而，此方法无法区分特异性与非特异性产物。

荧光探针法

以TaqMan探针为例，荧光探针法在探针两端分别标记了报告荧光基团和淬灭基团。在扩增过程中，探针与目标序列杂交，Taq酶的5'外切酶活性将其降解，使得荧光基团和淬灭基团分离，进而增强荧光信号。这一特性使得荧光探针法具备更高的特异性，仅在目标序列扩增时产生可检测的荧光信号。

实时监测及数据解读

在荧光定量PCR的每一个循环中，系统会实时检测荧光信号，无需在反应结束后进行额外的电泳或染色步骤。荧光信号的变化有效地反映了PCR产物的累积情况。通过信号累积，可以绘制扩增曲线，进一步确定每个反应管的CT值（循环阈值）。CT值与起始模板量的对数成线性关系，从而实现精确的定量分析。

定量分析

我们可以利用已知起始拷贝数的标准品制作标准曲线，进而计算未知样品的CT值。这种方法不仅可以实现绝对定量（直接计算拷贝数），也可用于相对定量（比较不同样本间的相对表达量），是生物医疗研究中非常有效的工具。

优势与应用

XPJ荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强、无污染、自动化程度高、结果可靠等显著优势，因此在基因表达分析、病原体检测和基因突变检测等多个生物医疗领域得到了广泛应用。这些优点使得XPJ产品在科学研究与临床检测中成为首选工具，推动了生物医学的发展。